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行業(yè)新聞

【志珩】生物工程下游技術(shù)
,涉及固液分離
、全發(fā)酵液提取等技術(shù)和設(shè)備

從古至今

,人類都沒有放棄對(duì)發(fā)酵工程的研究
,在當(dāng)今生物工程技術(shù)中它是一種“舊改新”的技術(shù)
,同時(shí)生物分離也是生物產(chǎn)品產(chǎn)業(yè)化的必經(jīng)之路
,分離效率直接決定產(chǎn)品的生產(chǎn)成本
,因此生物工業(yè)下游技術(shù)的發(fā)展日益受到研究者的重視

從廣義上講

,發(fā)酵工程由三部分組成:上游工程,發(fā)酵工程和下游工程
。其中
,下游工程指從發(fā)酵液中分離和純化產(chǎn)品的技術(shù):包括固液分離技術(shù)(離心分離,過濾分離
,沉淀分離等工藝)
;細(xì)胞破壁技術(shù)(超聲
,高壓剪切,滲透壓
,表面活性劑和溶壁酶等)
;蛋白質(zhì)純化技術(shù)(沉淀法,色譜分離法和超濾法等)

本質(zhì)上

,如何從混合原料中高效,快速
,特異捕獲目標(biāo)物質(zhì)是下游技術(shù)的首要解決問題
?這里對(duì)其中的固液分離技術(shù)的原理,方法和設(shè)備做一概括

1

,目標(biāo)物在胞內(nèi),通過固液分離才可以收集胞內(nèi)產(chǎn)物的細(xì)胞或菌體
,除去液相

2,分離除去細(xì)胞碎片

,獲得胞內(nèi)的目標(biāo)物

3,目標(biāo)物在液相中

,通過固液分離收集含生化物質(zhì)的液相
,除去固體懸浮物,如細(xì)胞
,菌體
,細(xì)胞碎片,蛋白質(zhì)的沉淀物和它們的絮凝體等

1

,傳統(tǒng)的固液分離適用于物理狀態(tài)不同的固液混合體;

2

,從發(fā)酵液中除去菌體細(xì)胞

3,除去細(xì)胞分裂后的細(xì)胞碎片

4

,沉淀出的蛋白質(zhì)或其他無(wú)機(jī)鹽等物質(zhì);

5

,因此有時(shí)需要通過凝聚或絮凝等創(chuàng)設(shè)條作加固形物
。同時(shí),也降低了粘度

6

,現(xiàn)在基于粒度不同:膜技術(shù)
,雙水相萃取,擴(kuò)展床吸附等

其目的在于在于分離細(xì)胞

,菌體和其他懸浮顆粒,還希望除去一部分雜質(zhì)并改變其性質(zhì)
,以利于后續(xù)的各步操作

對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行預(yù)處理可以促進(jìn)從懸浮液中分離固形物的速度,提高固液分離的效率:

加熱法:加熱可降低液體的黏度

,根據(jù)流體力學(xué)的原理
,如何通過濾餅的速率與液體的黏度成反比,可見降低液體黏度可有效提高過濾速率
;同時(shí)
,在適當(dāng)?shù)臏囟群褪軣釙r(shí)間下迅速轉(zhuǎn)換例如,鏈霉素發(fā)酵液
,調(diào)酸至PH3.0后
,加熱至70℃,維持半小時(shí)
,其黏度下降至原來(lái)的1/6
,過濾速度可增加10?100倍。

調(diào)節(jié)懸浮液的PH值: PH值直接影響發(fā)酵液中某些物質(zhì)的電離度和混合物性質(zhì)

,因此適當(dāng)調(diào)節(jié)發(fā)酵液的PH值可改善其過濾特性
。的方法之一。

凝聚和絮凝:凝聚和絮凝都是懸浮液預(yù)處理的重要方法

,其處理過程就是將化學(xué)藥劑預(yù)先加入到懸浮液中
,改變細(xì)胞,細(xì)胞碎片
,菌體和Pro等膠體粒子的分散狀態(tài)
,破壞其穩(wěn)定性
,轉(zhuǎn)變凝結(jié)成裂的顆粒
,適當(dāng)提高過濾速率,而且能有效地除去雜蛋白和固體雜質(zhì)
,提高分辨率質(zhì)量
。但凝聚和絮凝是兩種不同的方法,其具體處理過程還是有差異的
,應(yīng)該明確區(qū)分開來(lái)
,不可取代。


(1)凝聚:指向膠體懸浮液中加入某種電解質(zhì)

,在電解質(zhì)異電離子作用下
,膠體粒子的雙電層電位降低
,從而使膠體失去穩(wěn)定性散射粒子相互凝聚成1mm左右大小的塊狀凝聚體的過程。

(2)絮凝:指使用絮凝劑將膠體粒子交聯(lián)成網(wǎng)

,形成10mm左右大小的絮凝團(tuán)的過程
。其中絮凝劑主要起架橋作用。采用凝聚方法得到的凝聚體
,其顆粒往往只有1mm左右
,比較細(xì)小,有時(shí)不能有效地進(jìn)行分離
。而采用絮凝方法則?div id="jpandex" class="focus-wrap mb20 cf">?尚纬纱执蟮男跄w(10mm左右),使發(fā)酵液較容易分離


添加助濾劑:助濾劑是一種不可壓縮的多孔微粒
,它能使濾餅疏松,濾速增大這是因?yàn)槭褂弥鸀V劑后
,懸浮液中大量的細(xì)微粒子被吸附到助濾劑的表面上
,從而改變了濾餅結(jié)構(gòu),使濾餅的可壓縮性下降
,過濾衰減降低

常用的助濾劑有硅藻土,纖維素

,石棉粉
,珍珠巖,白土
,炭粒和淀粉等

添加反應(yīng)劑:通過添加一些不影響目標(biāo)物質(zhì)的反應(yīng)劑,可消除發(fā)酵液中某些雜質(zhì)對(duì)過濾的影響

,從而提高過濾速率
。加入的反應(yīng)劑與某些可溶性鹽類發(fā)生反應(yīng),生成不溶性沉淀
,如CaSO4
,AlPO4等。

添加草酸鹽除去高價(jià)無(wú)機(jī)離子:主要是Ca2 +

,Mg2 +和Fe2 +等

沉淀法: Pro是兩性物質(zhì),在酸性溶液中

,能與一些陰離子如三氯乙酸鹽
,水楊酸鹽,苦味酸鹽等形成沉淀
,在堿性溶液中
,能與一些陽(yáng)離子如Ag +
, Cu2 +,Zn2 +
,F(xiàn)e3 +和Pb2 +等形成沉淀

變性法:其中較常用的是加熱法,還有大幅度調(diào)節(jié)PH

,加酒精
,乙酸等有機(jī)溶劑或某些表面活性劑等方法。

吸附法加入某些吸附劑吸附雜蛋白而將其除去

固液分離是生物產(chǎn)品生產(chǎn)中經(jīng)常遇到的重要單元操作

,固液分離可以收集胞內(nèi)產(chǎn)物的細(xì)胞或菌體,分離除去液相
;還可以收集含生化物質(zhì)的液相
,分離除去固體懸浮物(細(xì)胞,菌體
,細(xì)胞碎片
,蛋白質(zhì)的沉淀物和它們的絮凝體等)。

因此

,培養(yǎng)基
,發(fā)酵液,某些中間產(chǎn)品和半成品等都需要進(jìn)行固液分離
,其方法很多
,傳統(tǒng)的方法是過濾和離心;現(xiàn)代一種全新的生物分離技術(shù)被提出
,即全發(fā)酵液提取
,主要用到的方法有膜技術(shù),雙水相萃取
,擴(kuò)展床吸附

過濾操作是過濾過濾介質(zhì),在一定的壓力差△p作用下

,使懸浮液中的液體通過介質(zhì)的孔道
,而固體顆粒被截留在介質(zhì)上,從而實(shí)現(xiàn)固液分離的單元操作

(1)過濾介質(zhì)

織物介質(zhì):又稱濾布

,應(yīng)用較普遍,包括由棉
,麻等天然纖維濾布和合成纖維濾布;

顆粒介質(zhì):有硅藻土

,珍珠巖粉
,細(xì)砂
,活性炭,白土等

多孔固體介質(zhì):如多孔陶瓷

,多孔玻璃,多孔塑料等
,可加工成板狀或管狀
,微小且耐腐蝕,常用于過濾含少量微粒的懸浮液

(2)常用設(shè)備

△按操作方式分類:間歇過濾機(jī)

,連續(xù)過濾機(jī)

△按操作壓強(qiáng)差分類:壓濾,吸濾和離心過濾

板框壓濾機(jī)(間歇操作):板框壓濾機(jī)的過濾推動(dòng)力來(lái)自泵產(chǎn)生的液壓或進(jìn)料儲(chǔ)存槽中的氣壓

。和細(xì)菌等多種發(fā)酵液的固液分離

轉(zhuǎn)筒真空過濾機(jī)(吸水,卸料
,再生連續(xù)化操作
,生產(chǎn)能力大,勞動(dòng)強(qiáng)度?div id="d48novz" class="flower left">
。?div id="d48novz" class="flower left">
。其主要適用霉菌發(fā)酵液,對(duì)菌體細(xì)小
,黏度大鋪助濾劑
過濾式離心機(jī):離心過濾是指借用旋轉(zhuǎn)液體所遭受的離心力而通過介質(zhì)和濾餅,固體顆粒被截留于過濾介質(zhì)表面的操作過程
對(duì)于濃度降低
,降低臨界值,硬度增大的不溶物
,可以采用過濾分離
。但當(dāng)固體顆粒細(xì)小而難以過濾時(shí),發(fā)酵液不易被過濾純化
,離心操作朝十分十分有效

離心分離是基于固體顆粒和周圍液體密度存在的差異,在離心場(chǎng)中使不同密度的固體顆粒加速分離的分離過程

。一般動(dòng)植物細(xì)胞的收集
,細(xì)胞碎片和沉淀的分離等常用離心分離。

利用離心機(jī)高速旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的離心力來(lái)實(shí)現(xiàn)分離

,具有分離速度快
,分離效率高,串行重復(fù)度好等優(yōu)點(diǎn);缺點(diǎn)是設(shè)備投資大
,連續(xù)排料時(shí)
,固相干度不如過濾設(shè)備。離心機(jī)的樣式有:斜角式
,平拋式
,管式,蝶式
,螺旋式
,多室式。

一種新型的生物分離技術(shù)概念
,集成化分離技術(shù)
,即對(duì)現(xiàn)有的兩種或兩種以上的單元操作進(jìn)行有效的組合,組成一種有效的單元操作
,以達(dá)到提高產(chǎn)品收率
,減少純化步驟,降低純化費(fèi)用和投資成本的目的

(1)膜技術(shù)

該技術(shù)的關(guān)鍵在于膜上連接的配基數(shù)量要大

,同時(shí)必須解決膜孔道的污染問題。

(2)雙水相萃取

向水相中加入縮水的某些碳水化合物化合物(如葡聚糖

,聚乙醇等)后
,形成密度不同的兩相,輕相中取代某種高分子化合物
,重相中取代鹽類或另類高分子化合物
,從而達(dá)到分離和提純某些高分子化合物的目的。

(3)伸縮床吸附

向細(xì)胞碎片懸浮液中加入某種固體吸附劑

,或者用細(xì)胞碎片懸浮液通過約會(huì)吸附劑的固定床
,即可達(dá)到除去細(xì)胞碎片的目的。主要的問題是很難選擇合適的吸附劑
,以保證目的產(chǎn)物不被吸附而損失

由于擴(kuò)展床吸附色譜技術(shù)具有集成化分離的優(yōu)點(diǎn),分離周期短

,成本低
,在生物產(chǎn)品的分離中應(yīng)用普遍,特別適用于含有細(xì)胞等固體粒子的粗制品的分離
。同時(shí)擴(kuò)展床介質(zhì)的配比基團(tuán)主要是離子交換配基
,疏水配基以及親和配基,只是
,決定了該技術(shù)不再重復(fù)蛋白質(zhì)分離
,即擴(kuò)展床技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域在不斷擴(kuò)大發(fā)酵液的分離純化技術(shù),在生物工程產(chǎn)品的下游處理過程中有十分廣闊的應(yīng)用前景
,目前通過科研人員不斷研究
,消化
,吸收國(guó)內(nèi)外同類產(chǎn)品優(yōu)良技術(shù)
,并在其中的固液分離設(shè)備在結(jié)構(gòu)形式上,分離效率
,自動(dòng)化水平
,功能集成,產(chǎn)品質(zhì)量和可靠性方面已經(jīng)有了質(zhì)的飛躍
,并在各行各業(yè)中不斷地被普遍應(yīng)用


隨著科技的不斷發(fā)展,無(wú)論是固液分離技術(shù)還是設(shè)備

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